水稻條紋病毒(Rice stripe virus, RSV)引起的水稻條紋葉枯病是目前我國以及東亞地區(qū)粳稻生產(chǎn)上最嚴(yán)重的病毒病害之一, 最近幾十年在我國多次爆發(fā)流行。中國農(nóng)科院植物保護(hù)研究所所長周雪平教授帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)在前期對(duì)該病毒的生物學(xué)、編碼蛋白功能及病毒病防控基礎(chǔ)上,進(jìn)一步深入探索了RSV和寄主植物之間的博弈,發(fā)現(xiàn)病毒在與植物共進(jìn)化過程中精巧地調(diào)控植物防御蛋白水平從而幫助病毒快速建立侵染。相關(guān)成果在線發(fā)表于12月9日的國際知名期刊《分子植物》(Molecular Plant)。(論文鏈接)
病毒侵染植物時(shí),只有穿過植物細(xì)胞之間的通道“胞間連絲”才能在植物細(xì)胞間移動(dòng),實(shí)現(xiàn)對(duì)植物的侵染。Remorin蛋白是陸地植物特有的蛋白之一,能夠特異定位到細(xì)胞膜脂筏上,通過影響胼胝體的積累來調(diào)控胞間連絲的通透性,相當(dāng)于把控胞間連絲孔徑大小的大門。
之前的研究發(fā)現(xiàn)該蛋白在調(diào)控病原物侵染過程中發(fā)揮重要作用。相對(duì)于真菌和細(xì)菌等植物致病微生物,病毒基因組小,結(jié)構(gòu)簡單,僅編碼數(shù)個(gè)蛋白,其中病毒編碼的運(yùn)動(dòng)蛋白能夠輔助病毒在細(xì)胞間進(jìn)行移動(dòng),那么小小的植物病毒是如何通過運(yùn)動(dòng)蛋白敲開植物細(xì)胞的通道之門的呢?
為鑒定參與調(diào)控RSV侵染植物的寄主因子以及了解RSV在細(xì)胞水平的侵染過程,周雪平團(tuán)隊(duì)首先利用iTRAQ蛋白質(zhì)譜結(jié)合病毒誘導(dǎo)的病毒沉默與CRISPR/Cas9體系成功鑒定了一個(gè)負(fù)調(diào)控RSV侵染的寄主因子NbREM1,NbREM1屬于remorin基因家族的Group1亞組。研究證實(shí)NbREM1通過調(diào)控細(xì)胞胞間連絲孔徑大小抑制RSV的細(xì)胞間移動(dòng)。
利用蛋白定量質(zhì)譜手段發(fā)現(xiàn)NbREM1在病毒侵染的初期蛋白水平顯著下調(diào),而轉(zhuǎn)錄本水平和對(duì)照相比并沒有顯著的差異,說明RSV侵染可能影響Remorin的翻譯后修飾過程。生化分析顯示NbREM1蛋白能夠被棕櫚?;揎?,而且NbREM1蛋白第206位半胱氨酸是其唯一的棕櫚酰化修飾位點(diǎn)。NbREM1的棕櫚?;揎椡蛔凅w滯留于植物的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及細(xì)胞質(zhì)中,并誘導(dǎo)細(xì)胞自噬途徑介導(dǎo)remorin蛋白降解,從而消除remorin對(duì)RSV細(xì)胞間移動(dòng)的負(fù)調(diào)控作用,加速了病毒在細(xì)胞間的移動(dòng),說明棕櫚?;揎棇?duì)于Remorin蛋白的細(xì)胞膜定位、蛋白穩(wěn)定性以及抑制病毒的細(xì)胞間移動(dòng)起到重要作用。
研究發(fā)現(xiàn),RSV侵染后能夠干擾Remorin蛋白的棕櫚?;揎?。深入研究顯示,RSV編碼的運(yùn)動(dòng)蛋白NSvc4能夠結(jié)合Remorin C端棕櫚?;揎椢稽c(diǎn)區(qū)域,干擾其棕櫚酰化修飾,導(dǎo)致Remorin細(xì)胞膜定位減弱并在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)大量聚集,誘導(dǎo)細(xì)胞自噬并被降解(見附圖)。RSV侵染導(dǎo)致Remorin的降解,有利于病毒打開胞間連絲快速進(jìn)行細(xì)胞間的移動(dòng)。
研究中選取了RSV的兩種自然寄主,單子葉寄主水稻和雙子葉寄主本氏煙,分別鑒定了兩種寄主植物對(duì)應(yīng)的Remorin蛋白,并發(fā)現(xiàn)RSV采用類似的手段干擾Remorin的棕櫚?;揎棽⑼ㄟ^自噬途徑降解該蛋白,減弱其對(duì)病毒細(xì)胞間移動(dòng)的抑制。本研究揭示了RSV在和寄主博弈中進(jìn)化的一種抑制寄主防御的新策略。
論文通訊作者為周雪平,第一作者為周雪平課題組博士研究生傅帥和徐毅。相關(guān)工作得到了國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)技術(shù)體系和國家基礎(chǔ)研究“973”計(jì)劃項(xiàng)目的資助。